文件下載    圖片下載    

PikoOrange蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品描述

PikoOrange Protein Quantitation Kit是一個(gè)高度敏感的基于熒光技術(shù)定量純化蛋白質(zhì)的試劑盒，其檢測(cè)蛋白濃度范圍為0.1-15 ug/ml。比起傳統(tǒng)定量方法如BCA、Bradford或Lowry蛋白定量分析，PikoOrange蛋白定量試劑盒敏感性更佳，此外，與NanoOrange蛋白質(zhì)定量測(cè)定技術(shù)相比具有更加的線性和重現(xiàn)性。PikoOrange蛋白定量試劑盒可顯示不同蛋白質(zhì)之間的zui小變異性，且熒光信號(hào)穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)16小時(shí)；其受測(cè)樣本不論為純化蛋白或抗體皆適用。

需特別注意的是，PikoOrange對(duì)鹽類、緩沖液、去垢劑或是其他化學(xué)物質(zhì)都有不同程度的耐受性（表2）。

                            圖1：PikoOrange比NanoOrange有更好的線性和重現(xiàn)性

產(chǎn)品組分

技術(shù)參數(shù)

Ex/Em 480/598 nm （結(jié)合BSA）。

運(yùn)輸和保存方法

室溫保存，不要冷藏PikoOrange緩沖液。PikoOrange Dye需避光保存，產(chǎn)品可穩(wěn)定保存至少12個(gè)月。如果緩沖液出現(xiàn)沉淀，可加熱到37℃并漩渦溶解。如果長(zhǎng)時(shí)間不用，組分C應(yīng)避光保存在4℃。

使用方法

1、準(zhǔn)備1x PikoOrange緩沖液: 1:10 稀釋10x緩沖液在dH2O。例如，添加1 mL10x 緩沖液至9 mL dH2O. 1 x PikoOrange緩沖液可以儲(chǔ)存在室溫下。

2、使用前準(zhǔn)備PikoOrange工作液：將500xPikoOrange染料按1:500用1x PikoOrange緩沖液稀釋。例如，添加10 uL 500xPikoOrange染料值5 mL 1x PikoOrange緩沖液。

注意：您將需要大約3 mL工作液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（見(jiàn)表1)以及每孔檢測(cè)樣品250 ul工作液。

3、準(zhǔn)備未知樣本：10 uL 樣本添加 250 uLPikoOrange工作液。

注意：您可能需要稀釋未知樣本的得到不同濃度的樣本。樣品稀釋可能會(huì)減少干擾物質(zhì)的影響。

4、準(zhǔn)備一個(gè)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線所需的BSA濃度，如表1所示。

5、樣本和標(biāo)準(zhǔn)蛋白加熱至90- 95℃ 10分鐘，此過(guò)程需避光操作。

6、取出樣本室溫避光放置20分鐘冷卻。短時(shí)間離心以收集全部樣本。

7、每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品或未知樣品取200 uL轉(zhuǎn)移到96孔酶標(biāo)板，熒光酶標(biāo)儀讀數(shù)。激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)為480/598 nm。

注意：另外，樣品可以被轉(zhuǎn)移到熒光試管使用熒光儀測(cè)量。如果需要超過(guò)200 uL體積測(cè)量，等比例放大配置方案。

表1：準(zhǔn)備BSA樣品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線

表2：PikoOrange對(duì)不同化學(xué)物質(zhì)的耐受性